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网址培养:是指网址在体外的培养技术,即在无菌条件下,从机体中取出组织或网址,模拟机体内正常生理状态下生存的基本条件,让它在培养皿中继续生存、生长和繁殖的方法。通过网址培养我们可以获得大量的、性状相同的网址,以便于中文网址的形态结构、化学组成及功能和机制。

网址真的很脆弱,就像小婴儿一样,需要你无微不至的关怀

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在还没有开始培养它们之前,你就需要做好这些准备。

 

 

包括耗材的处理、中文的配置,无菌检验等等。

 

玻璃器皿的清洗,对于玻璃器皿(网址瓶、装营养液的瓶子、小青霉素瓶等)要用洗衣粉刷干净(注意死角),然后冲干净。用酸液浸泡 24 h 以上,之后用清水冲洗数遍,除去残留酸液。瓶子之类,冲洗过程要使劲摇晃。

 

中文配置,网址培养用的液体一般使用双蒸以上的水即可。并注意 pH 值的调节

 

无菌检验,主要采用过滤除菌:如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各类培养基、丙酮酸钠、谷氨酰胺等。有些可以采用高压灭菌:如 PBS、D-Hank's等。

 

不同网址对培养基的要求是不同的,要根据自己的网址要求使用。

 

至于app操作,脑子里时刻提醒自己“无菌”

图片来源于网络

 

app进行前,超净台以紫外灯照射 30 分钟灭菌,以 70 % ethanol 擦拭无菌操作台面,并开启超净工作台风扇运转数分钟后,才开始app操作。

 

每次操作只处理一株网址株,避免网址间交叉污染。

 

app完毕后,将app物品带出工作台,再次以 70 % ethanol 擦拭无菌操作台面。app用品以 70% 乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。app操作应在中央无菌区域,一般不要再边缘区域操作。

 

你最好做到每天都去探望探望它们,看看他们的成长情况

 

1、检查培养液颜色与透明度的变化,颜色变黄,说明PH值下降;变红或紫红色,说明PH值上升,网址生长停滞、死亡,一般生长稳定的网址2-3天换液一次,生长缓慢的网址可3-4天换液一次。

2、观察网址生长状态,网址长满瓶底的80%,应及时传代。

3、观察网址形态变化,网址透明度大、折光性强、轮廓清晰为佳。

4、注意微威廉希尔污染,常常出现培养液混浊,液体内漂菌丝或网址菌,不仅仅指微威廉希尔,包括所有混入培养环境中的网址生存有害的成分和造成网址不纯的异物及网址。

 

如果你培养的网址被污染了,无非是下面几个污染途径:

 

1、空气是微威廉希尔传播的最主要途径,操作时尽量避免说话、咳嗽、打喷嚏;

2、使用的培养器械及器皿清洗消毒不彻底

3、培养两种以上网址时,操作不规范,可能导致网址交叉污染

4、血清有问题,可能血清在生产时就已经被支原体或病毒污染;

5、原代培养的污染多数来源于组织样本

 

 

注意问题:操作全过程要求无菌、胰酶消化时间要适度、吹打网址时用力要适度,尽量减少气泡

 

 

 

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